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称号:G-Rex悬浮细胞培育体系-T细胞首选
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产品简介:

用处:用于悬浮细胞培育。封锁体系,知足GMP出产请求

品牌:WILSONWOLF 

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G-Rex悬浮细胞培育体系-T细胞首选

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体系利用特色:

★ 一次性插手培育基,培育10天,细胞扩增100倍。不须要频频换液和操纵细胞

★ 静置培育,通俗的培育箱便可停止

★ 培育瓶与仪器共同,以半主动体例停止细胞收受接管

★ 出产CAR-T细胞与传统体例比拟抒发CD62LCD25的比例更高,抗肿瘤活性更强

★ 封锁体系,知足GMP出产请求

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G-Rex透气型培育容器截面申明图:


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体系构成:

1、GatheRex 细胞收受接管节制器  

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2、G-Rex培育容器

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定货信息:

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开放式培育瓶-用于CAR-T细胞优化培育前提及小规模扩增

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备注:终究取得的细胞数目与培育面积相干,培育面积不异的培育瓶,终究取得的细胞数目是近似的。

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其余利用,已证明在以下细胞培育中很是有用:

※ 免疫细胞培育(抗原特同性T细胞、EBV-CTLTLNKTregHSCLCLK562等的研讨和临床出产)

※ 单克隆抗体和重组抗体出产(杂交瘤、CHO293)

※ 胰岛运输(多至4000IE/cm2)

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初始培育前提保举:

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利用文献参考:


一、CAR-T(嵌合抗原受体润色的T细胞)的制备

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Molecular Therapy  vol.22 no.3,623-633 mar.2014

Knetics of Tumor Destruction by Chineric Antigen Receptor-modified T Ces(CAR-T细胞粉碎肿瘤的能源学研讨)

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作者:Usanarat Anurathapan1,et al,Juan F Vera1

单元:1Center for Cell and Gene Therapy,Baylor Colege of Medicine,Texas Children's Hospital,and Houston

Methodist Hospital,Houston,Texas,USA.

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择要:

CAR-T细胞作为血液恶性肿瘤和实体肿瘤的医治手腕的利用愈来愈普遍。可是,在输出T细胞靶向单一肿瘤相干的抗原产品的压力下会致使靶抗原调理,形成肿瘤免疫逃逸。为了避免这类景象的发生,咱们研讨了同时靶向两种差别的抗原对肿痛细胞的影响。namely mucin 1prostate stem ce两种抗原在包含胰腺癌和前线腺癌在内的多种实体肿瘤中抒发。零丁利用时,任何一种肿瘤抗原和CAR-T细胞的连系都能杀死肿瘤细胞,但肿瘤的异质性会致使免疫逃逸。咱们连系了两种抗原辨认的体例来显现更好的抗肿瘤成果,但这仍然缺少以到达完整减缓(CR)。为了领会肿瘤逃逸的机制,咱们研讨了T细胞杀伤的能源学,发明肿瘤粉碎的程度不只取决于靶抗原的存在,还取决于靶抗原抒发的强度。而这一特点能够或许或许经由进程epigenetic modulator上调靶标的抒发,和加强CAR-T细胞的杀伤力来转变。

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扼要尝试体例:

T细胞的病毒转导:将抒发CAR-MUC2CAR-PSCA的逆转录病毒在24孔板中传染。CAR-T细胞的疾速扩增利用G-REX 100M培育瓶,间接插手1L50U/ml IL-2的培育基停止扩增。

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尝试成果:

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针对差别靶点的CAR-T细胞医治成果:由于肿瘤存在异质性,针对单一靶点会发生肿瘤免疫逃逸。而连系了两种抗原辨认的CAR-T细胞,具有更强的抗肿瘤活性

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择要:

An Opimzed frocess of Generating CAR-T Cells for Cinical Applications

Pradip Bajgain1,et al,Juan F.Vera 1.

利用G-Rax100M扩端CAR-PSCA T细胞,初给细胞数25E+6,一次性插手1L培育基,每周插手3IL2,终究取得细胞数2963.8±195.2E+6

利用G-Rex出产的CAR-T细胞与传统体例培育20天比拟抒发CD62LCD25的比例更高,抗肿瘤活性更强。

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二、TCR-T细胞的制备

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JTransl Med (2018) 16:13

Erhanced ctinical-scale manutactuing of TCR rnsduced T-cels using closed cuture systen modues(利用封锁式体系加快临床级别TCR-T细胞的出产)

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作者:Jianjan Jin1,et al,David F.Stroncek1 and Steven L.Highfl

单元:1Center or Celular Engineering. Departnment of Tanstuslon Medcne, Cintcal Center,Natonal hstutes of

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择要:

背景:用于抒发特同性T细胞受体(TCR)的T细胞的基因工程已成为医治各类恶性肿瘤的新战略。由于缺少能够或许或许扩增充足数目标T细胞用于临床的封锁培育体系,使得这些范例的疗法的普遍利用遭到必然程度的限定。在这里,咱们评价了一个壮大的临床级制作TCR基因工程工巧胞的进程。

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体例:对人乳头瘤病毒E6E7TCR停止了自力测试。21天的进程分为一个转导期(7天)和一个疾速扩增期(14天)。用两份安康的供体样本和四份上皮癌患者的样本对这一进程停止了评价。

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成果:该进程使活的有核细胞增添了2000倍,并且转导效力高(64%-92%)。在培育竣事时,功效测定标明这些细胞有用而特异的杀伤肿瘤组胞的才能,并排泄多量的搅扰素和肿瘤坏死因子。培育的两个阶段接纳了封锁或半封锁的模块,包含第一阶段的主动密度梯度分手和细胞培育袋和第二阶段的封锁的G-Rex培育装配和洗濯/稀释体系。

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论断:利用模块化体系和半主动装备,能够或许或许大规模的制作高活性的临床级TCR转导的T细胞。该进程今朝正在NIH临床中间和一些停止中的临床尝试中利用,并可用于其余利用封锁体系扩展和优化其出产进程的细胞医治制作场合。

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出产流程图。

此图归纳综合了E6 TCR-E7 TCR-特同性T细胞的制作计划。第一阶段(左)概述了培育物的转导阶段,并持续至第7天。在培育阶段竣事时,细胞能够或许或许冷冻保管,或进入第二阶段(培育物的疾速扩增阶段)。在这一阶段,TCR转导的T细胞与来自三个差别供体的同种异体豢养细胞夹杂,并在封锁的G-REX500培育装配中扩增14天。

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三、TIL(肿瘤浸润淋巴细胞)的制备

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JImmunother.2012 April:35(3):283-292

Simplified Method ol tho Growth of Human Tumor Infilrating Lymphootes (TIL)in Gas-Permeable Flasks to Numbers Needed for Pationt Treatment(利用透气型培育瓶将TIL细胞培育至病人医治所需细胞数的筒双体例)

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作者:Jianjian Jin1,et al,Steven A. Rosonberg2

单元:1Cell Processing Section,Department of Transfuslon Medicine,Clinical Center,National Institutes of

Heatth Bothesda,Maryland,USA 2Surgery Branch,Natonal Cancer Instituto,National Institutos of Heath,Bothesda,

Maryland,USA 3Wlson Wolf Manutacturing.New Bnghton,MN,USA

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择要:利用自体肿瘤浸润肿瘤T淋巴细胞医治恶性玄色素瘤的临床成果很好。但TIL细胞的制备进程很是坚苦。在此,咱们利用一种透气型培育瓶成立了疾速扩增TIL细胞的简双体例。起首在G-Rex10中培育从肿瘤消化液和肿瘤碎片取得的TIL细胞,接上去利用能包容500ml培育基的G-REX100停止疾速的扩增培育。来历于14位患者中13个的肿瘤消化液和全数11个肿痛碎片的TIL细胞,在G-Rex10中胜利完成了初始发展。而后将取得的TIL细胞接种5×106TILG-Rex100中,发展7天后分至3G-Rex100。颠末2次疾速扩增,细胞可扩增成8-10×109,先将的TIL接种烧瓶中,为了取得用于患者医治的30-60×109组胞,咱们用接种6G-Rex1005x106细胞/瓶),扩增成18G-Rex100。用G-REX大规模培育TIL细胞,疾速扩增约莫须要9-10升培育基,约莫只要其做体例的1/3-1/4

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流程简介:

TIL的初始培育:将病人的肿瘤构造切成小块(1-8mm),插手酶消化(RPMI 1640.2mM Glutmax.10 u g/mL庆大霉素30 units/mL. Dnase1.0 mg/mL胶原酶),同时利用机器法停止构造分手。构造块插手消化液后当即机器分手1分钟、而后放入孵箱孵育30分钟,再次机器分手1分钟。再放入孵箱持续孵育30分钟,而后停止第三次机器分手。若是第三次分手以后仍有大块构造存在,能够或许或许再停止1-2轮处置。若是终究产品中有多量红细胞或死细跑,可停止密度梯度离心去除。

分手取得的细胞取10-40×106细胞插手40ml培育基,插手G-REX10培育瓶中停止培育。24孔板与G-REX10都放入孵箱,第2-3天换半液,培育至第五天。而后组胞转至G-REX100

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TIL的疾速扩端培育:

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尝试论断:整体来讲,与24孔板加通俗培育瓶和培育袋的流程比拟,用透气型G-REX培育瓶停止TIL的肇端培育与后续疾速扩增,须要的耗材更少,须要的培育基更少,须要的培育箱空间更少,须要的操纵更少。利用G-REX培育瓶,将使大大都尝试室能多量量培育TIL用于临床医治。

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四、CTL(抗原特同性T淋巴细胞)的制备进程

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JImmunother.2010 April:33(3):305-315

Accelerated production of antigen-specic T-cells for pre-clinical and clinical applications using Gas-

permeable Rapid Expansion culture ware(G-Rex)(利用G-REX加快抗原特同性T细胞的出产进程以停止临床前和临床利用)

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作者:Juan F.Vera,et. al.

单元:Center for Cell and Gene Therapy,Departments of Pediatrics,Immunology,Medicine,Virology,Baylor

College of Medicine,The Methodist Hospital and Texas Children's Hospital

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择要:用于过继免疫医治的抗原特同性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的多量制备,由于遭到其预期功效和特同性的限定是很是庞杂和破费时候的。其培育的前提很是刻薄,偶然只能在2cm2的孔中完成培育,但会遭到气体互换、养分物资和废料堆集的限定。为降服这些坚苦而接纳的一些生物反映器庞杂而高贵,并且偶然细跑发展的成果不佳。本研讨发明抗原特同性CTL在颠末安慰后会履历7-10次割裂。可是预期的CTL扩增倍数只要在培育的第一周能到达。经由进程反复第一周时的培育前提,咱们能够或许或许让CTL细胞扩增至预期的程度,这一程度能保持数周而不影响细胞表型和功效。可是所需24孔板的数目很是多,并且须要频仍的改换培育基,从而增添了尝试的庞杂性和出产本钱。是以,本研讨评价了一种新型的适气型培育装配(G-REX),该装配经由进程底部的硅胶膜通透氛围,使得细胞发展不受培育基深度的限定。

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尝试体例及成果:

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尝试论断:G-Rex体系能够或许或许有用的撑持CTL细胞的扩增,终究能够或许或许增添高达20倍的产量,但所需的手艺职员的时候却大大降落。主要的是,在此装配中的细胞扩增不是由于细胞割裂的多,而是由于细胞死的少。是以这一装配能增添T细胞产量,下降CTL出产时的庞杂性和用度。能够或许或许使细胞疗法更容易接管。

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五、NK(天然杀伤细胞)的制备

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Cytotherapy,2012;14:1131-1143

Large-scale ex viwo expansion and characterization of natural killer cells- for clinical applications(多量量体外扩增和判定NK细胞用于临床医治)

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作者:Natalia Lapteva1,et al.

单元:1Center for Cell and Gene Therapy.The Methodist Hospital,Texas Children's Hospital,Houston,TX and

2Department of Pediatrics,Baylor Colege of Medicine,Houston,Texas,USA,3National University of Singapore,

Singapore,and 4University of Arkansas Medical Center,Litle Rock,Arkansas,USA

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择要:

背景及目标:纯化和多量量扩增临床级别细胞的新体例使以NK细胞为根本的免疫疗法又引发人们的乐趣。

体例:咱们胜利的将之前颁发的,利用抒发1L-154-1BBLK562细胞扩增NK细胞的体例,用新型的透气型运动培育瓶(G-REX)停止了改良。

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成果:利用这一新的体系,咱们从15×107CD3-CD56+NK细胞起头,在8-10地利候内,制备了高达19×109具有功效的NK细胞。G-REX与传统透气袋比拟,扩增NK细胞的倍数更高,培育进程中不需换液或操纵细胞。咱们也发明在NK细胞上清安慰的环境下,K562-mb15-41BBL细胞能上调了细胞外表HLA1|型抗原的抒发,这一细胞能安慰NK细胞中自体反映性CD8+T细胞。可是这些CD3+T经胞利用CliniMACS体系胜利去除。咱们优化的NK细胞冻存体例使NK细胞冻存12个月后仍然有活气和功效。

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论断:咱们胜利成立了利用透气型G-REX运动培育并多量扩增NK细胞的体例,合适GMP规范。这一体例能用于制备NK细胞停止癌症免疫医治。

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长处:

※ 一样培育时候,细胞增殖更快

※ 每一个G-REX一次性插手400ml培育基,培育进程中无需换液,无需再续培育基

新宝6平台注册地址:※ 操纵少,削减净化的危险

※ 静置培育,在通俗的培育箱安排便可

※ 细胞收受接管时能够或许或许先弃去大局部培育基再离心(1000ml vs.8000ml),操纵更简略。

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视频材料:

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